我们都知道曾使用过即为“二手”,但二手不等于劣质。我们许多设备都是“二手的价格,一手的质量”。许多设备都是仅使用过一年多,有的甚至几个月,但价格仅为新设备的三分之一左右。价格为何如此便宜?因为我们以稍**废铁的价格云集了全国各地的化工加工设备。 您所需要的成套设备我们都有,需根据不同的生产厂家及质量而定。同时购销各种化工设备。
多聚甲醛固定美丽线虫体法 虫体的*二种常用的固定方法是使用多聚甲醛。此法比上述的Bouin固定法温顺,但通常需要使用胶原酶。这种方法尤其适用于检测成虫。 1.所需的溶液和试剂 4%多聚甲醛(新鲜配制,见附录Ⅳ); 含1%NP-40, 200mmol/L二硫基苏糖醇(DTT)的20mm01/L硼酸钠(pH9.6); 含1%NP一40的PBS;含50%甲醇,20mmol/LEDTA, 10mmol/L亚精胺盐酸的PBS。 2.操纵步骤 (1)用含0.05%NP-40的PBS(4℃)洗平皿的表面,以往除幼虫的生长介质。将全部液体转进一支15m1锥形管中。 (2)以200g离心1min。往除上清。将虫体转至另一1.5m1锥形管中,加进lml含0.05%NP一40的PBS(4℃)。 在固定液中的时间是非可影响不同抗原抗体结合的能力。根据所进行的实验应经过预试建立一个较佳的固定时间。 (3)以200g离心10s。尽可能将上清完全往除。 (4)加50/ll含50%甲醇、20mmol/LEGTA和10mmol/L亚精胺盐酸的PBS, 以及500/1l 4%多聚甲醛(新鲜配制,见附录Ⅳ)。将此管浸进液氮中快速冷冻。取出后在活动的温水中使其融化。随后再浸进液氮中。如上述一样在活动的温水中融化。 固定的虫体从液氮取出后,在-70℃可以至少保存一年。 (5)在4℃孵育1~24h。 (6)用含0.05%NP-40的PBS(4℃)洗涤虫体2次。 (7)离心,并往除较后的洗液。重悬于含1%NP-40,100mmol/L DIT的20mm01/L硼酸钠(pH9.6)中。在室温下孵育2ho 假如使用**阶段幼虫的样本,在孵育过程中还需要多冻融(同步骤4)2次,以增强透化处理。 (8)用含0.05%NP一40的PBS(4℃)洗3次。 (9)在含0.3%过氧化氢的20mmol/L硼酸钠(pH9.6) (新鲜配制)中孵育15min。 (10)用含0.05%NP-40的PBS(4℃)洗3次。 至此,样品可以加进抗体进行染色。